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  • 平面抗体芯片检测原理


    平面抗体芯片是一种高通量的蛋白质免疫检测分析技术,可以同时检测几百种蛋白质表达水平;也可以用来研究蛋白质翻译后加工(如磷酸化水平改变)。其原理是:将多种不同的捕获抗体按照预定的顺序排列并固定在固相支持物上,每种抗体孤立成点,形成抗体芯片。芯片与生物样品一起孵育,在温育过程中芯片上的抗体识别并捕捉对应的蛋白质抗原,然后通过某种方法在蛋白质抗原上标记荧光或化学发光基团,然后进行光学检测到的其光信号强弱就表征了相应蛋白质的丰度。
     
    双抗夹心法
    双抗夹心法是将捕获抗体预先固定在芯片上,生物样品加入到芯片上一起孵育反应后,其中对应的蛋白质与捕获抗体结合,然后加入生物素标记的检测抗体一起孵育,最后通过HRP-链霉亲和素与化学发光底物、或者荧光染料-链霉亲和素结合作为信号检测。
    基于“三明治”双抗夹心法建立的芯片,高品质的抗体对是此方法的关键,夹心法有很高的灵敏度,检测浓度可以低至1-10 pg/mL。每增加检测一个蛋白,芯片上就需要增加一个抗体对, 这样可能出现交叉反应,因此需要将每个抗体对与芯片上其他抗体对进行检测,验证是否可以引入这个抗体对,且不对其他抗体对检测造成干扰,通过优化筛选将交叉反应降到最小。由于抗体对之间可能存在的相互影响,双抗夹心法一次性检测蛋白的数量有所限制,但是可以用于蛋白的定量检测。双抗夹心法具有特异性好、灵敏度高、重复性和稳定性好的优点。
    ,样品标记法
             样品标记法将捕获抗体预先固定在芯片上,生物样品在检测前先进行蛋白质生物素标记,生物素标记后的样品加入到芯片上一起孵育反应后,捕获抗体结合特异性的蛋白,然后加入HRP-链霉亲和素与化学发光底物、或者荧光染色剂-链霉亲和素结合作为信号检测。
    样品标记法可以检测那些没有合适的抗体对来建立双抗体夹心法检测的分析物。因为溶液中没有自由的检测抗体与其他抗体相互作用产生干扰,基于抗体相互作用产生的交叉反应就可以避免,所以引入新的抗体到标记芯片上比较容易,一个芯片上可以有几百个甚至几千个抗体。标记法芯片非常适合于大批量的筛选试验,但是相对于夹心法芯片其CV略高,特异性略低。

    样品标记法原理
    如需了解更多平面抗体芯片技术的相关信息,欢迎与杏园生物技术支持联系交流。
     




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