技术优势
1. 灵敏性高:由于酶的高效生物催化作用,一个酶分子在数分钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应,产生了放大作用,使得原来极其微乎其微的抗原或抗体在数分钟后就可被识别出来,可达ng甚至pg水平。
2. 应用范围广:用于大分子、小分子抗原及抗体的定量测定,广泛应用于疾病的免疫诊断、临床标本的检查、血清流行病学调查以及基础科研的分子生物学实验。
3. 操作简便,重复性好。
4. 成本较低。
解决方案
1. 直接法:将抗原直接固定在固相载体上,加入酶标记的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要。优势在于操作手续简短,因无须使用二抗可避免交互反应。
2. 间接法:此测定方法与直接法类似,差别在于一级抗体没有酶标记,改用酶标记的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。优势在于二抗可以加强信号,而且有多种选择能做不同的测定分析。不加酶标记的一级抗体则能保留它最多的免疫反应性。
3. 双抗体夹心法:被检测的抗原包被在两个抗体之间,其中一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体。另一个则是检测抗体,此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量;或不标记,再透过酶标记的二级抗体来测定抗原的量。优势在于高灵敏、高专一性,抗原无须事先纯化。
4. 竞争法:样本里的抗原(自由抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一起竞争相同的抗体,当样品里的自由抗原越多,就可以结合越多的抗体,而固定抗原就只能结合到较少的抗体,反之亦然。经清洗步骤,洗去自由抗原和抗体的复合物,只留下固定抗原和抗体的复合物,拿来与只有固定抗原的对照组结果相比较,根据呈色差异就可计算出样品里的抗原含量。优势在于可适用比较不纯的样本,而且数据再现性很高。
实验报告
1. 提供原始的吸光度值数据
2. 根据标准品绘制标准曲线,对检测抗原进行定量。