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甲基化特异性PCR (MSP)
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甲基化特异性PCR (MSP) 服务
重亚硫酸盐转化 + 甲基化/非甲基化引物
甲基化特异性PCR（Methylation-Specific PCR, MSP）是检测DNA甲基化的经典方法。DNA经重亚硫酸盐处理后，未甲基化胞嘧啶(C)转化为尿嘧啶(U)，而甲基化胞嘧啶保持不变。设计针对甲基化(M)和非甲基化(U)序列的特异性引物，通过PCR扩增即可判断目标位点甲基化状态，具有快速、灵敏、无需特殊仪器的优势。
MSP · 核心优势
高灵敏度
可检测低至0.1%的甲基化等位基因，适用微量样本及早期筛查。
特异性强
针对甲基化/非甲基化序列分别设计引物，M和U两对引物交叉验证，结果可靠。
快速经济
无需测序或特殊设备，普通PCR仪+电泳即可完成，适合多样本筛查。
覆盖范围灵活
适用于单个或多个CpG位点检测，已知CpG岛启动子/增强子甲基化状态验证。
甲基化/非甲基化双引物设计 阳性/阴性对照严格质控 转化效率≥99.5%
MSP 标准化实验流程
1
DNA提取/纯化
高质量gDNA提取
2
重亚硫酸盐转化
未甲基化C→U
3
引物设计
甲基化/非甲基化特异性引物
4
PCR扩增
M管/U管平行扩增
5
电泳检测
琼脂糖凝胶判断条带
6
结果分析
甲基化状态判定+报告
技术规格与参数
| 检测原理 | 重亚硫酸盐转化 + 甲基化特异性引物PCR |
|---|---|
| 样本类型 | 基因组DNA（组织、细胞、血液、FFPE、cfDNA等） |
| DNA起始量 | 推荐100 ng-1 μg（可低至10 ng，经优化） |
| 转化方法 | 重亚硫酸盐化学转化（EpiTect / Zymo 等试剂盒） |
| 转化效率 | ≥99.5%（经内参基因评估） |
| 引物设计 | 甲基化(M)引物 / 非甲基化(U)引物套组 |
| 检测区域 | CpG岛、启动子、增强子等已知甲基化靶点 |
| PCR平台 | 普通热循环仪（ABI、Bio-Rad等）或qPCR仪（荧光MSP） |
| 检测灵敏度 | 可检出0.1%-1%甲基化等位基因比例 |
| 交付内容 | 电泳图谱/扩增曲线、甲基化状态结果、实验报告 |
| 周期 | 样本接收后5-7个工作日（常规项目） |
结果判读与质控体系
甲基化判定标准
M引物扩增阳性 → 甲基化等位基因存在；U引物扩增阳性 → 非甲基化等位基因存在；两者同时阳性 → 部分甲基化。
严格质控措施
每批包含甲基化阳性对照（体外甲基化DNA）、非甲基化对照（正常人DNA）及无模板阴性对照，确保转化及扩增有效性。
荧光MSP（qMSP）可选
升级为实时荧光定量MSP，提供更直观的Ct值和定量甲基化比例（% of methylated reference）。
双重验证推荐
对于关键样本或标志物开发，可加做亚硫酸盐测序（BSP）或焦磷酸测序验证MSP结果，确保准确性。
广泛应用领域
肿瘤标志物筛查
抑癌基因启动子甲基化（如MGMT、p16、RASSF1A）检测，辅助肿瘤早期诊断及预后评估。
产前诊断
印记基因甲基化异常检测（如Prader-Willi综合征、Angelman综合征）。
表遗传学机制研究
特定基因/启动子甲基化状态与基因表达关联分析。
药物反应/耐药预测
甲基化标志物与化疗药物敏感性相关评估。
衰老/环境表观研究
年龄及环境因素引起特定基因甲基化变化检测。
植物表观遗传
植物胁迫响应及发育相关的甲基化检测。
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