实时荧光定量PCR (RT-PCR)
实时荧光定量PCR (RT-PCR) 服务
实时荧光定量PCR（Real-time PCR）通过在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测扩增进程，对样本中的核酸进行精确定量。适用于基因表达分析、病原体载量检测、拷贝数变异等场景，具有高灵敏度、宽动态范围和高重复性等优势。
精准定量
采用绝对定量（标准曲线）或相对定量（2-ΔΔCt法），检测灵敏、动态范围宽（可达9个数量级）。
高灵敏度与特异性
采用SYBR Green染料法或TaqMan探针法，可检测低至单个拷贝的核酸分子，引物/探针双重质控。
多样化样本兼容
支持RNA/cDNA、gDNA、细胞裂解物、血浆、组织、FFPE等多种样本类型，适配各类实验需求。
严格质控与标准化
每板均包含内参基因、阴性对照、阳性对照及标准品，确保数据可靠性；重复孔CV值<5%。
RNA提取/cDNA合成
高质量RNA抽提、反转录
引物/探针设计
跨内含子设计、Tm优化
qPCR扩增
ABI/Roche 荧光定量平台
数据分析
标准曲线/相对定量计算
交付报告
循环阈值+图表
| 检测平台 | ABI 7500 / QuantStudio 系列 & Roche LightCycler 480 |
|---|---|
| 检测方法 | SYBR Green I 染料法 / TaqMan 水解探针法 |
| 样本类型 | 总RNA、cDNA、gDNA、FFPE-RNA、血浆cfRNA等 |
| RNA起始量 | 常规≥100 ng，低丰度靶标可低至10 ng（逆转录后检测） |
| 动态范围 | 至少9个数量级 |
| 灵敏度 | 可检测低至1-10拷贝/反应 |
| 重复性 | 板内CV<3%，板间CV<5% |
| 通量 | 支持96孔/384孔板，单次实验最多384个样本 |
| 数据交付 | 原始CT值、扩增曲线、熔解曲线（染料法）、标准曲线参数、定量结果表、分析报告 |
| 周期 | 样本接收后7-10个工作日（常规项目） |
绝对定量分析
构建标准曲线（5-7个浓度梯度），计算样本中靶标绝对拷贝数或浓度。
相对定量分析
2-ΔΔCt法计算基因表达差异倍数，提供统计检验（t-test/ANOVA），对应柱状图/箱线图。
扩增与熔解曲线
展示每条扩增曲线和熔解峰，评估引物二聚体及非特异性扩增。
热图与聚类分析
批量基因表达谱聚类热图，揭示样本/基因间表达模式。
内参基因筛选
提供12种常用内参基因筛选验证（ACTB、GAPDH、18S、B2M等），确保定量准确性。
miRNA/lncRNA定量
茎环法miRNA定量、长链非编码RNA绝对/相对定量服务。
基因表达分析
不同组织/处理/疾病状态下的mRNA、lncRNA、miRNA表达谱。
病原体核酸检测
病毒/细菌载量检测（COVID-19、HBV、HPV、沙门氏菌等）。
肿瘤标志物检测
肿瘤相关基因、循环肿瘤DNA/RNA定量分析。
药物疗效评价
药物干预后靶基因表达变化监测，药效动力学研究。
农业与动物模型
转基因拷贝数鉴定、品种鉴定、病原检测。
表观定量研究
MeDIP-qPCR、ChIP-qPCR富集效率评估。
一、样本类型
• 组织样本：新鲜/冻存组织 ≥ 50mg，避免RNase污染
• 细胞样本：贴壁/悬浮细胞 ≥ 1×10⁶个
• 全血样本：≥ 500μL，EDTA抗凝，禁用肝素
• RNA样本：体积 ≥ 20μL，浓度 ≥ 50ng/μL，无降解
• DNA样本：体积 ≥ 20μL，浓度 ≥ 30ng/μL
二、样本保存运输
• 组织/细胞样本：液氮或 -80℃ 保存，干冰运输
• RNA样本：-80℃ 保存，干冰运输，避免反复冻融
• 全血样本：4℃ 保存，72小时内送达
三、信息提供
• 样本名称、分组、检测基因名称、物种信息
• 目标基因序列或GeneID、内参基因选择
• 实验需求（绝对定量 / 相对定量）