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全基因组Bisulfite甲基化测序
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全基因组甲基化测序 (WGBS) 服务
Whole Genome Bisulfite Sequencing · 单碱基分辨率 · 全基因组覆盖
通过重亚硫酸盐转化结合高通量测序，绘制全基因组单碱基分辨率DNA甲基化图谱。精准检测5mC及5hmC修饰，适用于调控元件甲基化分析、疾病表观标志物发现及发育表观组研究。
WGBS · 核心优势
全基因组覆盖
无偏向性检测所有CpG、CHG、CHH位点甲基化状态，覆盖启动子、增强子、重复序列及基因间区。
单碱基分辨率
直接定位每一个胞嘧啶的甲基化水平，精准鉴定差异甲基化位点(DMS)及差异甲基化区域(DMR)。
高转化率 & 严格质控
重亚硫酸盐转化效率 >99.5%，引入λDNA/internal control评估转化率，确保数据质量。
深度生信分析
甲基化图谱可视化、样本聚类、DMR注释、Motif分析、功能富集及甲基化单倍型分析。
WGBS 标准化实验流程
1
DNA提取与片段化
超声打断至300-500bp
2
末端修复/加A/连接接头
甲基化适配体连接
3
重亚硫酸盐转化
非甲基化C→U，甲基化C保留
4
文库扩增与质控
扩增富集并检测片段分布
5
高通量测序
Illumina PE150 / DNBSEQ
6
生物信息分析
比对 ➔ 甲基化水平计算 ➔ 差异分析
严格防交叉污染设计 多种转化效率质控方案 支持微量DNA起始
技术规格与参数
| 样本类型 | 基因组DNA (细胞、组织、全血、FFPE、cfDNA等) |
|---|---|
| 样本起始量 | ≥ 500 ng (常规) ；可低至 100 ng (经优化建库法) |
| 测序平台 | Illumina NovaSeq 6000 / DNBSEQ-T7，双端150 bp |
| 数据量推荐 | 人/小鼠 ≥ 30× 基因组覆盖 (约 270 Gb raw data)，植物 ≥ 30× |
| 甲基化位点覆盖 | > 90% CpG 位点覆盖(人, 30×)，覆盖重复元件及非CpG甲基化 |
| 转化效率 | ≥ 99.5% (根据未甲基化内参 spike-in 评估) |
| 项目周期 | 标准交付 30-35 个工作日 (含建库、测序、基础分析) |
| 标准交付内容 | 原始数据(fastq)、质控报告、甲基化水平矩阵(bedGraph/bigWig)、DMR/DMS列表、注释报告、样本PCA/聚类图、差异甲基化热图及功能富集分析 |
高级生物信息分析 · 深度挖掘甲基化功能
全甲基化组图谱
Circos图展示染色体甲基化密度，启动子/增强子区域甲基化水平统计，样本间相关性热图。
差异甲基化区域(DMR)
基于滑动窗口或隐马尔可夫模型鉴定DMR，并注释至CpG岛、启动子、基因体等元件。
功能富集与通路分析
差异甲基化基因GO/KEGG富集，揭示信号通路与生物学过程关联。
甲基化单倍型区块
分析单倍型甲基化水平，鉴定关联调控元件与转录因子结合位点。
WGBS 典型应用领域
肿瘤表观组学
全基因组甲基化异常图谱、早筛标志物及预后甲基化特征。
发育与分化
胚胎发育、干细胞分化过程中的甲基化动态变化。
神经科学/精神疾病
阿尔茨海默症、精神分裂症脑组织/血液甲基化标志物。
植物甲基化
作物表观遗传变异、胁迫响应甲基化调控网络。
复杂疾病/代谢病
糖尿病、心血管疾病表观甲基化差异分析。
药物表观药理学
药物处理引起的全基因组甲基化变化及新靶点发现。
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| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 样本类型 | 组织、细胞、gDNA |
| 样本起始量 | 组织 ≥30 mg；细胞 ≥1×10⁶；gDNA ≥1 μg（浓度≥50 ng/μL） |
| 质量要求 | DNA完整性好，无明显降解（凝胶检测） |
| 保存运输 | -80℃保存，干冰运输 |